MICROBIOLOGIA RÁPIDA 2021Por Margaret Ordóñez Smith de Danies PhDInstituto de Microbiología Colombiano IMICOL |
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INTRODUCCIÓNHoy en día se debe evitar los tratamientos empíricos, por ello, se ha tratado de hacer modificaciones en las técnicas (antibiogramas) que dan información sobre cuál antibiótico se debe dar en el tratamiento de una infección. Es menester saber con cuál antibiótico se debe eliminar la bacteria causal de la afección que está produciendo al enfermo. TÉCNICAS DE ANTIBIOGRAMAS RÁPIDOS MOS.En este proyecto se presentan dos modificaciones a la técnica estándar para dar rápidamente los resultados de la infección causada por una bacteria. Siempre se ve la lentitud de los informes en nuestro campo y esto amerita un cambio. Hay algunos laboratorios que todavía en el año 2021 toman de 3 a 8 días para informar un urocultivo, demorando la hospitalización de los pacientes y aumentando el costo de su enfermedad. Se comparó los resultados de los laboratorios con equipos sistematizados y las nuevas técnicas de antibiogramas rápidos MOS, (se realizaron las pruebas con varias muestras orinas, esputos, heces); y no hay diferencia significativa en el informe de la sensibilidad antimicrobiana, pero si hay una gran ventaja al emplear las nuevas técnicas rápidas MOS para muestras de urgencia, ya que son mucho más rápidas y más oportunas para dar un tratamiento eficaz y veraz. Hay reportes con 3 a 10 días de diferencia, porque los laboratorios sistematizados no informan hasta obtener la bacteria aislada y pura, la mayoría de las muestras vienen con dos o más bacterias, por eso es la demora hasta tenerla pura, y diferenciar entre saprofítica y patógena para llevar a cabo el antibiograma estándar o MIC o prueba de sensibilidad con MALDI-TOF. Además, las técnicas rápidas MOS son mucho más económicas y sencillas, todos los laboratorios las podrían implementar y ese sería nuestro objetivo, dar más servicio y más rápidos los resultados al médico. Por eso el siguiente paso será buscar la aprobación de ellas con la FDA y la CLSI. |
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DESCRIPCION DE LAS TÉCNICAS MANUALES RÁPIDAS MOS.Veamos estos dos métodos de antibiogramas manuales y rápidos MOS (Figura No. 1 y 2).Se estudiaron 694 muestras de orina de las cuales 130 sirvieron para estudiar dos nuevas técnicas manuales para antibiogramas urinarios con orinas de recuentos bacterianos >100.000 UFC/mL, la técnica directa dio una confiabilidad del 99% y la segunda técnica modificada denominada método de enriquecimiento MOS igualmente dio una confiabilidad del 99% (p>0.900) en relación con la técnica estándar de difusión en disco de la CLSI (Clinical Laboratory Standards Institute). Con estas técnicas no es necesario esperar al aislamiento bacteriano. El antibiograma se puede leer de 6 a 8 horas como lo describe Barry y se reconfirma a las 18 horas. O sea, se está ganando con las dos técnicas nuevas de difusión un día o a veces hasta 10 de hospitalización, si se compara con la estándar o MIC . 1. Método de Antibiograma Directo MOS.Esta modificación de la técnica de difusión en disco nació un viernes en 1982 cuando una paciente salió del baño llorando porque le dolía mucho al orinar y el médico le había mandado a hacer: “un urocultivo, recuento de colonias con antibiograma”. Ella me preguntó: “Cuándo me tiene el resultado?” y le dije: “Lamentablemente hasta el miércoles, porque este fin de semana el lunes es festivo, debo tener la bacteria aislada para hacerle el antibiograma y, además no sé si su muestra tenga una o dos bacterias”. La vi tan triste que me dije para mí misma: “Tengo que inventar algo para ayudarla”. Sembré la orina directamente con el escobillón en el agar Mueller Hinton y al día siguiente, vi que ya podía dar un resultado tentativo, llamé al médico le conté lo que había realizado y me dijo: “Confío en Ud. le voy a mandar el antibiótico que Ud. me indica”. Al martes siguiente, llamé a la paciente y cuál no sería mi sorpresa me dice: “Gracias doctora, no sabe cuánto le agradezco que ese antibiótico me obró el mismo día y ya me siento otra”. Motivada por este hecho, pues el miércoles cuando le realicé la difusión en disco estándar dió la misma sensibilidad del antibiograma realizado con la orina directa, comencé a hacer diferentes siembras comparando con la técnica estándar de esa época de la NCCLS hoy llamada CLSI. Después de 39 años de este invento han sido muchas las orinas que he realizado y muchísimas las personas que he podido ayudar.Se iniciaron estas modificaciones a la técnica de difusión en disco estándar con orinas, se publicó y se registró con derechos de autor Margaret Ordóñez Smith en 1994. Para orinascon infecciones agudas o sea cuando hay un recuento mayor a 100.000 UFC/mLo en una orina centrifugada se observan cuatro cruces de bacterias. El método directo MOS no sirve para infecciones cuyos uroanálisis sean menores de tres cruces de bacterias. Cuando la bacteriuria es causada por la Escherichia coli su resultado se obtiene en 6 a 10 horas después de haber recibido la muestra y se reconfirma a las 18 horas, no requiere de tener la bacteria aislada y pura. Este método de antibiograma directo MOS sirve también para muestras de secreciones vaginales con Mobiluncus o Gardnerella vaginalis y para diarreas con una sola bacteria entero patógena. Es muy útil porque el Mobiluncus o la Gardnerella son bacterias de difícil crecimiento y obtener el antibiograma no es nada fácil. Elmétodo directo MOS con las muestras de orina es muy sencillo, en la Figura No.1, sesiembran colocando el escobillón dentro del frasco de la orina o colocando 12 asas de 10 ul, ésta se esparce en forma de siembra masiva como cuando se hace un antibiograma estándar, enseguida se colocan los sensidiscos se incuba a 37˚C por 18 horas y se hace como en el método estándar de difusión en disco de la CLSI con el Manual 100 de interpretación de las zonas de inhibición. En caso de ser un caso de urgencia se puede hacer la lectura preliminar a las 6 horas como se puede observar en las figuras 3 y 4. Cuando se va a interpretar se mira la tabla de interpretación de las zonas de inhibición, sin embargo, es mejor restar 4 mm de la zona de inhibición para no cometer errores.
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Figuras 1 y 2. Métodos de antibiogramas rápidos MOS (Margaret Ordóñez Smith). Superior la Directa e inferior la de enriquecimiento.
Figura 3. En la parte superior: la Directa MOS (izquierda) y la de Enriquecimiento (dejando la orina 4 horas a 37˚C) (derecha) y en la parte inferior: enriquecimiento MOS dejando la orina en CTS (izquierda) y la estándar CLSI (derecha).
Tabla No. 1. Las lecturas de los diámetros de las zonas de inhibición de la foto de la Figura No. 3.
Figura 4. Urocultivo mixto con Klebsiella pneumoniae y Enterococcus, con un tamizaje con dos antibióticos uno sólo le sirve en este caso.
2. Método de Antibiograma de Enriquecimiento MOS.Este método tiene la ventaja del Antibiograma Directo MOS, sirve para cualquier tipo de espécimen con bajos o altos recuentos de colonias y da más precisa la interpretación de los diámetros de los halos de inhibición. Esta nueva técnica se realiza así: Se toma 1.0 mL de orina en 2.0 mL de caldo triptona soya (CTS) y con especímenes de heridas, secreciones de ojo, vaginales, etc. se coloca la muestra en el caldo a 37˚C y se controla cada hora hasta obtener la turbidez requerida. En nuestro estudio la incubación en el CTS depende del tipo de germen, lo usualen Gram negativos requiere 2 horas de incubación y con Gram positivos de 4 horas para llegar a la concentración requerida de la Escala de McFarland No. 0.5. Este paso es bastante crítico (como en el método estándar), porque se necesita tener un inóculo como el de la escala de McFarland No. 0.5. Enseguida se procede a hacer lo mismo que en el método estándar: sembrar en el Agar Mueller Hinton (AMH), incubar e interpretar igual. En este método las interpretaciones son iguales a la del estándar. Con la misma muestra de la bacteriuria con una Escherichia coli estudiada en la Figura No.5 los diámetros de las zonas de inhibición son realmente muy semejantes entre sí. La orina (1 mL) se incubó en el CTS (2 mL) hasta obtener la turbidez de la Escala de McFarland por ello no hay diferencia porque es hacer un antibiograma como Kirby Bauer lo describió.En la Tabla No 2 se ve en la interpretación del Método de Antibiograma de Enriquecimiento MOS no es necesario de restar ningún milímetro, se interpreta exactamente igual a la estándar de la CLSI.
Figura No. 5. Método de Enriquecimiento MOS (izquierda) y estándar de difusión en disco de CLSI (derecha) de un urocultivo de más de 100.000 UFC/mLde E coli CTS o en propia orina y estándar CLSI.
Tabla No. 2. Las lecturas de los diámetros en milímetros (mm) de las zonas de inhibición de la técnica de enriquecimiento MOS de la bacteria de la foto de la Figura No. 5.
En caso de no tener en el Laboratorio de Bacteriología el CTS se puede dejar la muestra de orina hasta que llegue a la turbidez de la Escala de McFarland No. 0.5, en este caso la orina se incubó por 4 horas a 37˚C en la Figura No 3 la podemos observar en la parte superior derecha, y su interpretación es bastante similar (Tabla No. 2). Con el Método de Enriquecimiento MOS esta misma orina se incubó1 ml de orina en 2 ml del caldo triptona soya (CTS) incubando a 37˚C por 2 horas y media hasta obtener la turbidez de la Escala de McFarland (inferior izquierda). A la derecha inferior se ve el cultivo del método estándar CLSI. Como se puede ver no hay diferencia significativa entre los cuatro antibiogramas, pero sí hay diferencia en los tiempos de entrega de los antibiogramas. Con el directo se pudo leer a las 4:30 horas de haber recibido la muestra del paciente, la de enriquecimiento con CTS a las 7 horas sin CTS a las 8 horas y media y la estándar a los dos días sí sólo hay una bacteria como en este caso, porque cuando hay dos bacterias es menester de esperar a que cada bacteria se aisle, se identifique para saber a cuál se le hace el antibiograma, y el resultado se demora de 3 a 5 días en promedio. Con el Método de Enriquecimiento MOS usando el CTS podemos entregar el mismo día el resultado del antibiograma en promedio de 6 a 10 horas.
CONCLUSIÓNSiempre en un hospital, clínica o consultorio, es de vital importancia obtener lo más pronto posible el resultado de un antibiograma porque se le puede dar al médico el reporte de qué antibiótico le es sensible a la bacteria causal de la infección. El médico le da un tratamiento acertado al paciente y por ende, logre su mejoría lo más pronto posible. Recuperar la salud es lo vital, reducir la resistencia bacteriana y bajar costos en las clínicas u hospitales.
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